小鼠Ⅳ型膠原  Col ⅣELISA試劑盒  酶聯免疫吸附測定試劑盒
使用說明書elisa法測定
規格：48T/96T
本試劑盒僅供體外研究使用!
ELISA法定量測定人尿液或其它相關生物液體中小鼠Ⅳ型膠原  Col ⅣELISA試劑盒  的含量。
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 操作步驟 實驗開始前，請提前配置好所有試劑，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的小鼠Ⅳ型膠原  Col ⅣELISA試劑盒 檢測范圍。 

. 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液00μl，余孔分別加標準品或待測樣品00μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應20分鐘。 

為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。 

2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加標記抗體工作液 00μl（取μl標記抗體加99μl標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制），37℃,60分鐘。 

3. 溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡-2分鐘，200μl/每孔，甩干。  

4. 每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液（同標記抗體工作液） 00μl，37℃，60分鐘。 

5. 溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡-2分鐘，200μl/每孔，甩干。 

6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔顯色不明顯，即可終止）。 

7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。 

8. 用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后5分鐘以內進行檢測。