大鼠ELISA試劑盒樣本處理要求和注意事項介紹
實驗原理
大鼠ELISA試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被大鼠鉀離子通道2（PIC2）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠鉀離子通道2（PIC2）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。
樣本處理及要求
.血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后000×g離心20分鐘，取上清即可，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
2.血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃000×g離心5分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
3.組織勻漿：用預冷的PBS(0.0M,pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果），稱重后將碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按:9的重量體積比，比如g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄。在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。后將勻漿液于5000×g離心5~0分鐘，取上清檢測。
4.細胞培養物上清或其它生物標本：請000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
注：標本溶血會影響后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。
需要而未提供的試劑和器材
.酶標儀（450nm）
2.高精度加樣器及槍頭：0.5-0uL、2-20uL、20-200uL、200-000uL
3.37℃恒溫箱
4.蒸餾水或去離子水
注意事項
.嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
2.洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
3.消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。
4.底物顯色液應呈無色或很淺的顏色，已經變藍的底物液不能使用。
5.避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。
6.在儲存和溫育時避免強光直接照射。
7.平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
8.任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。
9.不能使用過期產品。
0.如果可能傳播疾病，所有的樣品都應管理好，按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。
試劑準備
大鼠ELISA試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡后方可使用。
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按：20稀釋，即份20×洗滌緩沖液加9份蒸餾水。
