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產品名稱 | 人牙齦成纖維細胞 | 組織來源 | 牙齦組織 |
規格 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | 包裝 | T25培養瓶 |
貨號 | GOY-01X1375 | 細胞形態 | 成纖維細胞樣 |
人牙齦成纖維分離自牙齦組織；牙齦指緊貼于牙頸周圍及鄰近的牙槽骨上淡紅色的結構，由復層扁平上皮及固有層組成。是口腔黏膜的一部分，血管豐富，呈淡紅色，堅韌而有彈性，因缺乏黏膜下層，直接與骨膜緊密相連，故牙齦不能移動。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的表皮成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現為小的突起；6h后細胞基本貼壁wan全，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
方法簡介：
公司實驗室分離的人牙齦成纖維采用yi蛋白酶-膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測：
公司實驗室分離的人牙齦成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次；
生長特性 貼壁
細胞形態 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳3-5代左右
消化液 0.25%yi蛋白酶
培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
準備工作
1. 實驗器材準備：準備無菌的培養皿、培養瓶、移液管、離心管、手術器械等，并進行高壓滅菌或其他合適的消毒處理。
2. 試劑準備：配制或購買合適的培養基、消化酶（如、膠原酶等）、胎牛血清、雙抗等試劑，確保其無菌且在有效期內。
3. 實驗動物或組織來源準備：根據實驗需求，選擇合適的動物并進行相應的麻醉或處死，獲取所需組織；或從已有的組織樣本庫中獲取組織。
取材與處理
1. 取材：在無菌條件下，迅速取出目標組織，盡量減少對組織的損傷，并去除多余的脂肪、結締組織等非目的組織。
2. 清洗：將取出的組織用預冷的無菌PBS沖洗數次，以去除血液和雜質。
3. 剪切：將組織剪成約1 - 2mm3的小塊，以便后續消化。
細胞分離
1. 消化：將剪碎的組織塊放入含有適量消化酶的離心管中，在37℃恒溫搖床或培養箱中消化一段時間。期間可輕輕搖晃離心管，使消化更均勻。
2. 終止消化：當組織塊大部分被消化成單細胞懸液或小細胞團時，加入含血清的培養基終止消化。
3. 過濾與離心：用細胞篩過濾細胞懸液，去除未消化的組織碎片，然后將濾液以適當的轉速離心，收集細胞沉淀。
細胞觀察與檢測
1. 日常觀察：每天用倒置顯微鏡觀察細胞的形態、生長狀態、密度等，記錄細胞的變化情況，如發現細胞污染或異常，及時采取相應措施。
2. 細胞計數與活力檢測：在需要時，可采用臺盼藍染色等方法對細胞進行計數和活力檢測，以了解細胞的生長情況和健康狀態。
人成骨肉瘤細胞；Saos-2 | 人正常肝細胞；L-02 |
人組織細胞淋巴瘤細胞；U937[U-937] | 假單胞菌分離瓊脂 |
人急性淋巴母細胞性白血病細胞；MOLT-4 | 氣單胞菌鑒別瓊脂 |
正常大鼠腎細胞；NRK | 氣單胞菌瓊脂（膽鹽氯酚紅亮綠瓊脂） |
人Burkitt淋巴瘤細胞；Daudi | 氣單胞菌培養基基礎（Ryan） |
人急性T淋巴細胞白血病細胞；Jurkat,CloneE6-1 | NAC瓊脂培養基 |
人Burkitt淋巴瘤細胞；CA46 | NAC液體培養基 |
荷斯坦奶牛胎兒成纖維細胞；pCSN2-HLZ | 洋蔥假單胞菌瓊脂基礎（PC） |
兔腎細胞；RK13 | 蔗糖胰蛋白胨肉湯 |
人腎透明細胞腺癌細胞；769-P | 脫脂奶蔗糖蛋白胨培養基基礎 |
SV40轉化的非洲綠猴腎細胞；COS-7 | AHM鑒別培養基 |
人腎腺癌細胞；ACHN | 普通瓊脂 |
人子宮頸鱗狀細胞癌細胞；SiHa | 人牙齦成纖維細胞RS瓊脂 |
人卵巢腺癌細胞；SK-OV-3 | 假單胞菌瓊脂培養基P基礎 |
豬外周血淋巴細胞分離液試劑盒 | 假單胞菌瓊脂培養基F基礎 |
一、取材與分離
1. 快速操作
- 組織取材后需立即處理，避免長時間暴露于室溫或非營養環境。
- 使用無菌 PBS 或生理鹽水沖洗組織，去除血液、雜質。
2. 消化酶選擇
- 根據組織類型選擇消化酶，避免過度消化導致細胞損傷。
- 消化時間需嚴格控制（通常 10-30 分鐘），可通過顯微鏡觀察細胞解離狀態。
二、培養條件優化
1. 培養基選擇
- 使用含血清或特定生長因子的培養基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分細胞需添加胰島素、EGF 等。
- 避免頻繁更換培養基品牌或批次，減少細胞適應壓力。
2. 貼壁與傳代
- 原代細胞貼壁能力較弱，可能需要包被培養皿（如膠原蛋白、多聚賴氨酸）。
- 傳代時密度建議控制在 70%-80%，過度匯合會導致接觸抑制和分化。
三、污染控制
1. 無菌操作
- 全程在超凈臺操作，使用一次性耗材，避免交叉污染。
- 培養基中可添加雙抗，但長期使用可能影響細胞活性。
2. 支原體檢測
- 定期檢測支原體污染（如 PCR 法），污染后需及時丟棄細胞。
四、狀態監控
1. 日常觀察
- 每天檢查細胞形態、密度及培養基顏色，及時更換培養基（通常每 2-3 天換液一次）。
- 異常形態（如細胞變圓、碎片增多）可能提示污染或營養不足。
2. 傳代與凍存
- 原代細胞分裂次數有限（一般 5-10 代），需及時凍存早期代次細胞。
- 凍存液建議使用 DMSO+血清（或專用凍存培養基），梯度降溫后液氮保存。
