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產品名稱 | 大鼠肝竇內皮細胞 | 組織來源 | 肝臟組織 |
規格 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | 包裝 | T25培養瓶 |
貨號 | GOY-01X0842 | 細胞形態 | 內皮細胞樣 |
大鼠肝竇內皮分離自肝臟組織；肝臟是身體內以代謝功能為主的一個器官，并在身體里面起著去氧化、儲存肝糖、分泌性蛋白質的合成等作用；肝臟也制造消化系統中之膽汁。肝臟是機體內臟里最大的器官，位于機體中的腹部位置，在右側橫隔膜之下，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方，胃的上方。肝臟是機體消化系統中最大的消化腺，為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官，又是新陳代謝的重要器官。肝臟在機體位置和形態結構：肝臟位于右上腹，隱藏在右側膈下和肋骨深面，大部分肝為肋弓所復蓋，僅在腹上區、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁，肝上面則與膈及腹前壁相接。肝竇內皮細胞（SEC）是肝臟內所占比例最高的非實質細胞，位于肝竇腔與肝細胞之間，具有物質轉運、吞噬、抗原提呈、免疫耐受等功能。SEC由于擁有一般細胞所沒有的窗孔結構、細胞間連結松散、內皮下缺少基底膜而使其具有高度通透性，從而達到快速交換各種大小分子的目的。肝在遭到多種病原侵襲時，肝竇內皮細胞窗孔逐漸減少或消失，內皮下基膜形成，產生類似于連續型毛細血管的結構，這一過程稱為肝竇毛細血管化。它由多種因素引起，其過程極復雜，在多種肝病的發病前期階段均有出現，近年來受到廣泛關注。
方法簡介：
公司實驗室分離的大鼠肝竇內皮采用混合酶灌流消化、反復低速離心、密度梯度離心法，并通過內皮細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測：
公司實驗室分離的大鼠肝竇內皮經CD31、CD14免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態 內皮細胞樣
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%yi蛋白酶
培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
準備工作
1. 實驗器材準備：準備無菌的培養皿、培養瓶、移液管、離心管、手術器械等，并進行高壓滅菌或其他合適的消毒處理。
2. 試劑準備：配制或購買合適的培養基、消化酶（如、膠原酶等）、胎牛血清、雙抗等試劑，確保其無菌且在有效期內。
3. 實驗動物或組織來源準備：根據實驗需求，選擇合適的動物并進行相應的麻醉或處死，獲取所需組織；或從已有的組織樣本庫中獲取組織。
取材與處理
1. 取材：在無菌條件下，迅速取出目標組織，盡量減少對組織的損傷，并去除多余的脂肪、結締組織等非目的組織。
2. 清洗：將取出的組織用預冷的無菌PBS沖洗數次，以去除血液和雜質。
3. 剪切：將組織剪成約1 - 2mm3的小塊，以便后續消化。
細胞分離
1. 消化：將剪碎的組織塊放入含有適量消化酶的離心管中，在37℃恒溫搖床或培養箱中消化一段時間。期間可輕輕搖晃離心管，使消化更均勻。
2. 終止消化：當組織塊大部分被消化成單細胞懸液或小細胞團時，加入含血清的培養基終止消化。
3. 過濾與離心：用細胞篩過濾細胞懸液，去除未消化的組織碎片，然后將濾液以適當的轉速離心，收集細胞沉淀。
細胞觀察與檢測
1. 日常觀察：每天用倒置顯微鏡觀察細胞的形態、生長狀態、密度等，記錄細胞的變化情況，如發現細胞污染或異常，及時采取相應措施。
2. 細胞計數與活力檢測：在需要時，可采用臺盼藍染色等方法對細胞進行計數和活力檢測，以了解細胞的生長情況和健康狀態。
人伯基特淋巴瘤細胞；EB-3 | 人宮頸癌細胞；H1HeLa |
人急性T淋巴細胞白血病細胞；Jurkat | Biotin-C5-amino-C5-amino |
人乳腺導管癌細胞；MDA-MB-175Ⅶ | Bipenquinate |
人乳腺癌細胞；MDA-MB-415 | 2，3-丁二醇 |
人急性T淋巴細胞白血病細胞；JurkatE6-1 | Bis(2-methyl-3-furyl)disulfide |
人乳腺導管癌細胞；MDA-MB-435 | 雙吲哚馬來酰亞胺 IV |
人乳腺癌細胞；MDA-MB-436 | BIX-01294 |
人B淋巴細胞急性白血病細胞BALL-1 (STR鑒定正確) | BIX-01294 trihydrochloride |
人大細胞肺癌細胞；NCI-H460 | N-羥基琥珀酰亞胺生物 |
人肺鱗癌細胞；NCI-H2170 | Biotin LC hydrazide |
人大細胞肺癌細胞；NCI-H661 | 生物酰肼 |
人小細胞肺癌細胞；NCI-H69 | BIBO3304 TFA |
人漿細胞白血病細胞；NCI-H929 | 大鼠肝竇內皮細胞BIBF0775 |
人結直腸腺癌細胞；NCI-H716 | BI-3802 |
DMTr-LNA-5MeU-3-CED-phosphoramidite | BI-3406 |
一、取材與分離
1. 快速操作
- 組織取材后需立即處理，避免長時間暴露于室溫或非營養環境。
- 使用無菌 PBS 或生理鹽水沖洗組織，去除血液、雜質。
2. 消化酶選擇
- 根據組織類型選擇消化酶，避免過度消化導致細胞損傷。
- 消化時間需嚴格控制（通常 10-30 分鐘），可通過顯微鏡觀察細胞解離狀態。
二、培養條件優化
1. 培養基選擇
- 使用含血清或特定生長因子的培養基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分細胞需添加胰島素、EGF 等。
- 避免頻繁更換培養基品牌或批次，減少細胞適應壓力。
2. 貼壁與傳代
- 原代細胞貼壁能力較弱，可能需要包被培養皿（如膠原蛋白、多聚賴氨酸）。
- 傳代時密度建議控制在 70%-80%，過度匯合會導致接觸抑制和分化。
三、污染控制
1. 無菌操作
- 全程在超凈臺操作，使用一次性耗材，避免交叉污染。
- 培養基中可添加雙抗，但長期使用可能影響細胞活性。
2. 支原體檢測
- 定期檢測支原體污染（如 PCR 法），污染后需及時丟棄細胞。
四、狀態監控
1. 日常觀察
- 每天檢查細胞形態、密度及培養基顏色，及時更換培養基（通常每 2-3 天換液一次）。
- 異常形態（如細胞變圓、碎片增多）可能提示污染或營養不足。
2. 傳代與凍存
- 原代細胞分裂次數有限（一般 5-10 代），需及時凍存早期代次細胞。
- 凍存液建議使用 DMSO+血清（或專用凍存培養基），梯度降溫后液氮保存。
