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小鼠腎小管上皮分離自腎組織；腎臟是機體的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除體內代謝產物及某些廢物、毒物，同時經重吸收功能保留水份及其他有用物質，如葡萄糖、蛋白質、氨基酸、鈉離子、鉀離子、碳suan氫鈉等，以調節水、電解質平衡及維護酸堿平衡。腎臟同時還有內分泌功能，生成腎素、促紅細胞生成素、活性維生D3、前列腺素、激肽等，又為機體部分內分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能，保證了機體內環境的穩定，使新陳代謝得以正常進行。腎小管是機體腎臟器官上與腎小囊壁層相連的一條細長上皮性小管，具有重吸收（reabsorption）和排泌作用。腎小管按不同的形態結構、分布位置和功能分成近端小管、髓袢和遠端小管三部分；近端小管可分為直部和曲部，曲部也稱為近曲小管，位于皮質迷路內，于腎小體附近高度蟠曲；遠端小管曲部也稱為遠曲小管，位于皮質迷路內。腎小管上皮細胞是腎小管外面的一層細胞，腎小管上皮細胞的分離、培養是研究腎臟疾病的一項重要技術，目前該分離方法有酶分離法、化學分離法篩網分離法、顯微解剖分離法、流式細胞儀分離法等。腎小管上皮細胞主要功能：①腎小管上皮細胞重吸收原尿中幾乎全部的葡萄糖和氨基酸；②排泌非營養物質進入終尿；③細胞能分泌炎癥介質如細胞因子和趨化因子，通過產生IL-8或直接趨化白細胞參與急性炎癥反應；④移植腎炎癥和新月體腎炎中PTEpiC表達IL-2R和MHC-Ⅱ類抗原，這說明腎小管上皮細胞參與腎免疫損傷的發生。隨著對腎間質纖維化機制研究的日漸加深，腎小管上皮細胞（RTECs）在其中的作用日益被人們重視。因此，提供良好的腎小管上皮細胞模型，在腎小管間質疾病的發病機制和治療藥物篩選的研究中是非常重要的。
方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠腎小管上皮采用先機械研磨過不銹鋼網篩分離得到腎小管、后用膠原酶消化，結合上皮細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測：

公司實驗室分離的小鼠腎小管上皮經Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 上皮細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%yi蛋白酶

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

準備工作

1. 實驗器材準備：準備無菌的培養皿、培養瓶、移液管、離心管、手術器械等，并進行高壓滅菌或其他合適的消毒處理。

2. 試劑準備：配制或購買合適的培養基、消化酶（如、膠原酶等）、胎牛血清、雙抗等試劑，確保其無菌且在有效期內。

3. 實驗動物或組織來源準備：根據實驗需求，選擇合適的動物并進行相應的麻醉或處死，獲取所需組織；或從已有的組織樣本庫中獲取組織。

取材與處理

1. 取材：在無菌條件下，迅速取出目標組織，盡量減少對組織的損傷，并去除多余的脂肪、結締組織等非目的組織。

2. 清洗：將取出的組織用預冷的無菌PBS沖洗數次，以去除血液和雜質。

3. 剪切：將組織剪成約1 - 2mm3的小塊，以便后續消化。

細胞分離

1. 消化：將剪碎的組織塊放入含有適量消化酶的離心管中，在37℃恒溫搖床或培養箱中消化一段時間。期間可輕輕搖晃離心管，使消化更均勻。

2. 終止消化：當組織塊大部分被消化成單細胞懸液或小細胞團時，加入含血清的培養基終止消化。

3. 過濾與離心：用細胞篩過濾細胞懸液，去除未消化的組織碎片，然后將濾液以適當的轉速離心，收集細胞沉淀。

細胞觀察與檢測

1. 日常觀察：每天用倒置顯微鏡觀察細胞的形態、生長狀態、密度等，記錄細胞的變化情況，如發現細胞污染或異常，及時采取相應措施。
2. 細胞計數與活力檢測：在需要時，可采用臺盼藍染色等方法對細胞進行計數和活力檢測，以了解細胞的生長情況和健康狀態。

一、取材與分離

1. 快速操作

- 組織取材后需立即處理，避免長時間暴露于室溫或非營養環境。

- 使用無菌 PBS 或生理鹽水沖洗組織，去除血液、雜質。

2. 消化酶選擇

- 根據組織類型選擇消化酶，避免過度消化導致細胞損傷。

- 消化時間需嚴格控制（通常 10-30 分鐘），可通過顯微鏡觀察細胞解離狀態。

二、培養條件優化

1. 培養基選擇

- 使用含血清或特定生長因子的培養基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分細胞需添加胰島素、EGF 等。

- 避免頻繁更換培養基品牌或批次，減少細胞適應壓力。

2. 貼壁與傳代

- 原代細胞貼壁能力較弱，可能需要包被培養皿（如膠原蛋白、多聚賴氨酸）。

- 傳代時密度建議控制在 70%-80%，過度匯合會導致接觸抑制和分化。

三、污染控制

1. 無菌操作

- 全程在超凈臺操作，使用一次性耗材，避免交叉污染。

- 培養基中可添加雙抗，但長期使用可能影響細胞活性。

2. 支原體檢測

- 定期檢測支原體污染（如 PCR 法），污染后需及時丟棄細胞。

四、狀態監控

1. 日常觀察

- 每天檢查細胞形態、密度及培養基顏色，及時更換培養基（通常每 2-3 天換液一次）。

- 異常形態（如細胞變圓、碎片增多）可能提示污染或營養不足。

2. 傳代與凍存

- 原代細胞分裂次數有限（一般 5-10 代），需及時凍存早期代次細胞。

- 凍存液建議使用 DMSO+血清（或專用凍存培養基），梯度降溫后液氮保存。