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HSP70 免疫組化檢測試劑盒

【概要描述】HSP70 免疫組化檢測試劑盒H,M,R,RbWestern Western免疫印跡(Western Blot)是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上,然后利用抗體進(jìn)行檢測。

型號: 點(diǎn)擊量:582 廠商性質(zhì):代理商 更新日期:2016-01-06
產(chǎn)品詳情

HSP70 免疫組化檢測試劑盒Western Blot技術(shù):

一、 原理

SouthernNorthern雜交方法類似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被檢測物是蛋白質(zhì),探針是抗體,顯色用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品,轉(zhuǎn)移到固相載體例如硝#纖維素薄膜上,固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì),且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原,與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng),再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng),經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測蛋白水平的表達(dá)。

二、分類HSP70 免疫組化檢測試劑盒 現(xiàn)常用的有底物化學(xué)發(fā)光ECL和底物DAB呈色,體同水平和實(shí)驗(yàn)條件的是用*種方法,目前發(fā)表文章通常是用底物化學(xué)發(fā)光ECL。只要買現(xiàn)成的試劑盒就行,操作也比較簡單,原理如下二抗用HRP標(biāo)記:反應(yīng)底物為過氧化物+魯米諾,如遇到HRP,即發(fā)光,可使膠片曝光,就可洗出條帶。

三、 主要試劑

、 丙烯酰胺和NN’-亞甲雙丙烯酰胺,應(yīng)以溫?zé)?/font>以利于溶解雙丙稀酰胺的去離子水配制含有29%(w/v)丙稀酰胺和%(w/v)NN’-亞甲雙丙烯酰胺儲存液丙稀酰胺29gNN-亞甲叉雙丙稀酰胺g,加H2O至 00ml儲于棕色瓶,4℃避光保存。嚴(yán)格核實(shí)PH不得超過7.0,因可以發(fā)生脫氨基反應(yīng)是光催化或堿催化的。使用期不得超過兩個(gè)月,隔幾個(gè)月須重新配制。如有沉淀,可以過濾。 2、 十二烷基硫#SDS溶液:0%(w/v)0.gSDSmlH2O去離子水配制,室溫保存。

3、 分離膠緩沖液:.5mmol/L Tris-HCl (pH8.8):8.5gTris48mlmol/L HCl 混合,加水稀釋到00ml終體積。過濾后40℃保存。

4、 濃縮膠緩沖液:0.5mmol/L Tris-HCl (pH6.8):6.05gTris溶于40mlH2O中,用約48ml mol/L HCl調(diào)至pH6.8加水稀釋到00ml終體積。過濾后40C保存。這兩種緩沖液必須使用Tris堿制備,再用HCL調(diào)節(jié)PH值,而不用 Tris.CL

5、 TEMED原溶液NNN’N’四甲基乙二胺催化過硫#銨形成自由基而加速兩種丙稀酰胺的聚合。PH太低時(shí),聚合反應(yīng)受到抑制。0%(w/v)過硫#胺溶液。提供兩種丙稀酰胺聚合所必須的自由基。去離子水配制數(shù)ml,臨用前配制.

6、 SDS- PAGE加樣緩沖液:pH6.8 0.5mol/L Tris緩沖液8ml,甘油6.4ml0%SDS 2.8ml,巰基乙醇3.2ml0.05%溴酚藍(lán).6mlH2O 32ml混勻備用。按::2比例與蛋白質(zhì)樣品混合,在沸水終煮3min混勻后再上樣,一般為20-25ul,總蛋白量00μg

7、 Tris-甘氨#電泳緩沖液:30.3gTris88g甘氨#0gSDS,用蒸餾水溶解至000ml,得0.25mol/L Tris-.92mol/L甘氨#電極緩沖液。臨用前稀釋0倍。

8、 轉(zhuǎn)移緩沖液:配制L轉(zhuǎn)移緩沖液,需稱取2.9g甘氨#5.8gTris堿、0.37g SDS,并加入200ml甲醇,加水至總量L

9、 麗春紅染液儲存液:麗春紅S 2g ##30g 磺基水楊# 30g 加水至00ml 用時(shí)上述儲存液稀釋0倍即成麗春紅S使用液。使用后應(yīng)予以廢棄。

0、 脫脂奶粉5%(w/v)

、 NaN3 0.02% 疊氮鈉有毒,戴手套操作,溶于磷#緩沖鹽溶液(PBS)

2、 Tris緩沖鹽溶液(TBS):20mmol/LTris/HCl(pH7.5)500mmol/LnaCl

3、 Tween20(5)鼠抗人-MMP-9(6)鼠抗人-TIMP-

4、 過氧化物酶標(biāo)記的第二抗體。

5、 NBT(溶于70%二甲基甲酰胺,75mg/ml)

6、 BCIP(溶于00%二甲基甲酰胺,50mg/ml)

7、 00mmol/LTris-HCl(pH9.5)

8、 00mmol/L NaCl

9、 50mmol/LTris-HCl(pH7.5)5mmol/L EDTA可以參看分子克隆

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