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小鼠IgG ELISA試劑盒操作步驟

更新時(shí)間:2015-11-04 點(diǎn)擊量:772

小鼠IgG ELISA試劑盒基本原理:
    本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心 ELISA法。用抗小鼠IgG單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的 IgG與單抗結(jié)合,加入酶標(biāo)抗體,形成免疫復(fù)合物連接在板上,加入酶底物TMB,出現(xiàn)藍(lán)色,加終止液硫酸,顏色變黃,在450nm處測(cè)OD值,IgG濃度與OD值成正比,可通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中IgG濃度。
小鼠IgG ELISA試劑盒操作步驟
    實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)測(cè)量樣品含量,如樣品濃度過(guò)高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品00μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)20分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。ELISA試劑盒
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 00μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。 
4. 每孔加檢測(cè)溶液B工作液(同檢測(cè)A工作液) 00μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。ELISA試劑盒
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后立即進(jìn)行檢測(cè)。

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