方法概述 　　

    革蘭氏染色法是細菌學中廣泛使用的一種鑒別染色法，884年由丹麥醫師、細菌學家 Christain Gram創立。 細胞　　

    為觀察方便，脫色后再用一種紅色染料如堿性蕃紅、稀釋復紅等進行復染。陽性菌仍帶紫色，陰性菌則被染上紅色。有芽胞的桿菌和絕大多數的球菌，以及所有的放線菌和真菌都呈革蘭氏正反應；弧菌，螺旋體和大多數致病性的無芽胞桿菌都呈現負反應。革蘭氏陽性菌對敏感，革蘭氏陰性菌對敏感。可根據革蘭氏染色法鑒別不同菌種并對癥下藥。 　　 

    革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌在化學組成和生理性質上有很多差別，染色反應不一樣。現在一般認為革蘭氏陽性菌體內含有特殊的核蛋白質鎂鹽與多糖的復合物，它與碘和結晶紫的復合物結合很牢，不易脫色，陰性菌復合物結合程度底，吸附染料差，易脫色，這是染色反應的主要依據。 另外，陽性菌菌體等電點較陰性菌為低，在相同PH條件下進行染色，陽性菌吸附堿性染料很多，因此不易脫去，陰性菌則相反。所以染色時的條件要嚴格控制。例如，在強堿的條件下進行染色，兩類菌吸附堿性染料都多，都可呈正反應；PH很低時，則可都呈負反應。此外，兩類菌的細胞壁等對結晶紫—碘復合物的通透性也不一致，陽性菌透性小，故不易被脫色，陰性菌透性大，易脫色。所以脫色時間，脫色方法也應嚴格控制。

染色原理 　　

    G﹢菌：細胞壁厚，肽聚糖網狀分子形成一種透性障，當乙醇脫色時，肽聚糖脫水而孔障縮小，故保留結晶紫-碘復合物在細胞膜上。呈紫色。 　　

    Gˉ菌：肽聚糖層薄，交聯松散，乙醇脫色不能使其結構收縮，其脂含量高,乙醇將脂溶解，縫隙加大，結晶紫-碘復合物溶出細胞壁，番紅染液復染后呈紅色。

操作流程 　　

    革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟，具體操作方法是： 　　

（）載玻片固定。在無菌操作條件下，用接種環挑取少量細菌于干凈的載玻片上涂布均勻，在火焰上加熱以殺死菌種并使其粘附固定。 　　

（2）草酸銨結晶紫染分鐘。 　　

（3）自來水沖洗，去掉浮色。 　　

（4) 用碘-溶液媒染分鐘，傾去多余溶液。 　　

（5）用中性脫色劑如乙醇（95%）或丙酮酸脫色30秒，革蘭氏陽性菌不被褪色而呈紫色，革蘭氏陰性菌被褪色而呈無色。 細胞　　

（6）用蕃紅染液復染30秒，革蘭氏陽性菌仍呈紫色，革蘭氏陰性菌則呈現紅色。革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌即被區別開。